通过简化的包容体提取和再折叠方法在体外生成可溶性,免疫反应性重组JEVE蛋白质

科学领域:

• 病毒学 病毒学
• 分子生物学分子生物学
• 免疫学 免疫学 免疫学

背景情况:

• 日本脑炎 (JE) 是蚊子传播的病毒性疾病,没有有效的治疗方法.
• 目前的JE疫苗是基于JEV基因型III (GIII),但基因型I (GI) 正在成为主导.
• 周围神经损伤 (PNI) 是一种新观察到的症状,可能与JEV GI菌株有关,其中包括包裹 (E) 蛋白.

研究的目的:

• 为了克隆和表达一个JEV GIb菌株 (NX1889) 的信封 (E) 基因.
• 开发一种有效的方法来生产可溶性和免疫反应性JEV E蛋白质.
• 评估这种重组E蛋白的潜力,用于JEV GI的诊断和病原学研究.

主要方法:

• 将JEV GIb NX1889 E基因克隆到pET-32a (+) 等离子体中.
• 在 *Escherichia coli* (大肠杆菌) BL21 (DE3) 中以包含体的形式表达E蛋白.
• 开发了一种简化溶解和逐步透析重新折叠协议,使用氧化还原系统.
• 用多克隆抗体和免疫小鼠血清对重新折叠的复合E蛋白进行鉴定和免疫活性测试.

主要成果:

• 在大肠杆菌中实现了JEV E蛋白质纳入体的高产表达.
• 一种简化,经济的重新折叠方法成功生成了可溶和高度免疫反应的JEV E蛋白.
• 重复折叠的E蛋白在免疫小鼠中显示出高抗体标位 (>1:409,600),并在多种物种 (小鼠,子,人类) 中识别出抗体.

结论:

• 建立了一种高效和经济的方法,使用 prokaryotic 表达系统生产免疫反应的 JEV GIb E 蛋白质.
• 这种重组E蛋白具有重要的潜力,用于开发JEV GI感染的诊断工具.
• 这些发现有助于了解JEV的发病因子,特别是关于外周神经损伤.