一个高吞吐量测定基基甲基甘氨酸胺氨酸合成酶

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 酶学 是一种酶学.
• 癌症新陈代谢 癌症新陈代谢

背景情况:

• 精氨酸生物合成的代谢重编程是癌症的标志.
• 基基甲基甘氨酸胺基合成酶 (PFAS) 在 de novo purin 生物合成和肝癌生存预后方面至关重要.
• 目前尚无已知PFAS活性的特定抑制剂,这凸显了治疗缺口.

研究的目的:

• 为 PFAS 的合成域开发一种新的,连续的光谱测定方法.
• 建立一种适用于高通量查 (HTS) 的试验法,以确定PFAS抑制剂.
• 促进 PFAS 作为潜在的癌症治疗药物的小分子抑制剂的发现.

主要方法:

• 开发了一种基于机制的光检测方法,使用酸酸酶基质6,8-二-4-甲基贝利酸 (DiFMUP).
• 描述了PFAS酶动力学,确定K_M为108 ± 7μM的DiFMUP周转率.
• 优化和缩小了1536井的测试格式,并使用LOPAC¹²⁸⁰库进行了试点HTS.

主要成果:

• 开发的测试显示了HTS的优异性能指标,包括平均Z'为0.94±0.02和信号对噪声的5.01±0.06.
• 试验HTS的命中率为1.18%,表明该试验在识别潜在抑制剂方面的有效性.
• 该试验显示出出色的板间相关性,确保可重现性和可靠性.

结论:

• 已经建立了一个强大的和敏感的连续光谱测定法来检测PFAS合成酶活性.
• 这种试验适用于HTS,并为推进PFAS酶学研究提供了关键的工具.
• 该试验将作为发现功能探针和开发用于癌症治疗的新型小分子抑制剂的基础.