一个新的选系统,以表征和工程师定量会灭乳酸酶

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 生物化学 生物化学
• 酶学 是一种酶学.

背景情况:

• N-acyl l-homoserine乳 (AHLs) 是量子感应中的关键细菌信号分子.
• 乳酸酶会使AHL无活化,抑制细菌的毒性和生物膜的形成.
• 针对特定的细菌物种需要具有高基质特异性的乳酶,这些细菌的自然多样性有限.

研究的目的:

• 开发一种新的,中速选系统,用于评估乳酶活性.
• 为了方便识别和工程的乳酸酶与改变基质特异性.
• 通过工程质量灭酶来实现细菌群体的选择性向.

主要方法:

• 通过将N-acyl l-homocysteine thiolactone环开口与5,5-dithio-bis-(2-nitrobenzoic acid) 结合,开发了一种染色体检测方法.
• 该试验与细胞溶解酸相容,适用于来自不同蛋白质家族的乳酸酶.
• 选了GcL乳酶的突变库,并进行了动态表征.

主要成果:

• 选系统成功评估了乳酶活性,并确定了具有显著变化的基质特异性的GcL变异.
• 特定变种显示,对长链AHL的活性降低了多达1900倍,对短链基质的偏好增加了38倍.
• 这些结果得到了基因特征的支持,该特征是 thiolactonase 和 homoserine lactonase 的活性.

结论:

• 已经建立了一个强大而通用的乳酶查系统,改进了对酶活性的评估.
• 这种系统加速了定量基质特性的定量火酶的发现和工程.
• 开发的系统将有助于制定选择性细菌群体调节的策略.