通过结合电穿孔和脂肪切割,有效地对猪胚胎进行基因编辑

科学领域:

• 遗传学 遗传学 是一个
• 分子生物学分子生物学
• 发展生物学 发展生物学

背景情况:

• 马赛克主义是CRISPR-Cas9介导的阴茎细胞基因编辑的一个重大挑战.
• 在猪胚胎中有效的基因改造对于农业和生物医学应用至关重要.

研究的目的:

• 为了比较CRISPR-Cas9基因编辑在猪胚胎中的效率,使用联合电穿孔和脂化技术.
• 评估不同导向RNA (gRNA) 序列和传递时间对基因编辑结果的影响.

主要方法:

• 通过电穿孔设计和测试了六种不同的向氨基酶N (APN) 的gRNA,以检测猪囊中通过电穿孔的基因编辑效率.
• 选择了最有效和最不有效的gRNAs进行进一步的测试,采用电穿孔和脂浸法结合的方法.
• 实验涉及到在体外受精 (IVF) 后的不同时间点的Zona pellucida (ZP) - 完整和ZP-free胚胎.

主要成果:

• 特定的gRNAs (gRNA4和gRNA6) 显示出明显的突变率,其中gRNA6产生最高.
• 在使用gRNA4的ZP无胚胎中,将电穿孔与随后的化相结合,与单独使用电穿孔相比,总和双基突变率显著增加.
• 在使用gRNA6.6时,额外的脂化并没有显著改善突变率.

结论:

• 电穿孔结合化可以提高猪胚胎中CRISPR介导的基因编辑效率,特别是在使用具有较低初始突变率的gRNA时.
• 基因编辑的时间,特别是电穿孔和脂穿孔之间的间隔,在实现最佳结果方面起着至关重要的作用.