利用细胞聚合物用于增强腺相关病毒制造:培养策略和扩大规模的考虑
Brian Ladd1,2, Torbjörn Gräslund1,3, Véronique Chotteau1,2
1AdBIOPRO, VINNOVA Competence Centre for Advanced Bioproduction by Continuous Processing, Royal Institute of Technology (KTH), Stockholm, Sweden.
Biotechnology progress
|January 23, 2025
概括
这项研究表明,在水箱生物反应器中使用HEK293T细胞聚合物产生复合腺相关病毒 (rAAV). 这种可扩展的方法显示了与传统技术相比,对加强RAAV制造的承诺.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 细胞培养工程 细胞培养工程
- 病毒载体生产病毒载体生产
背景情况:
- 再组合腺相关病毒 (rAAV) 是基因疗法的关键载体.
- 当前的生产方法通常依赖于二维培养,限制了可扩展性.
- HEK293T细胞通常用于rAAV生产.
研究的目的:
- 通过在式生物反应器 (STR) 中作为聚合物培养的附着HEK293T细胞来研究生产rAAV的可行性.
- 探索替代注射策略,并开发一个可扩展的查系统,以形成聚合物.
- 评估细胞聚合物的潜力,以加强rAAV的生产.
主要方法:
- 单个HEK293T细胞的扩张,然后在STR中通过介质稀释形成聚合物.
- 细胞聚合物的三重等离子体转化.
- 研究高细胞密度 perfusion (HCDP) 培养物用于注射和查震动多井板中的聚合物形成.
- 使用平均输入功率作为聚合物形成的缩减标准.
主要成果:
- 在STR.中使用HEK293T细胞聚合物的rAAV生产成功的概念验证.
- 从HCDP培养物中通过已消耗的介质识别了转染的抑制.
- 在12个井板中证明了聚合物形成,适合选,尽管聚合物比STR更大.
- 与单细胞相比,STR中的细胞聚合物显示出与单细胞相比,更高的时空rAAV产量的潜力.
结论:
- 在STR中HEK293T细胞聚合物为扩大和加强rAAV生产提供了一个有希望的方法.
- 这种方法超越了用于rAAV制造的传统二维扩展方法.
- 需要进一步优化,特别是在培养媒介组件对传染效率的影响方面.
