在大肠杆菌BL21 (DE3) 中优化亲胰岛素的产生,使用塔古奇法和高效的一步性胰岛素净化,通过在列上的酶分离
Shahin Hadadian1, Mina Sepahi2, Samin Sedighi3
1Nano-Biotechnology Department, New Technologies Research Group, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. hadadian@pasteur.ac.ir.
概括
研究人员优化了大肠杆菌中复合人体胰岛素的产生,确定了温度和IPTG度等关键因素. 这种新的净化方法实现了高产量和纯度,为糖尿病治疗提供了一种高效的方法.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 糖尿病是一种全球性健康问题,需要有效的胰岛素生产.
- 再组合人体胰岛素的生产对于控制糖尿病至关重要.
- 优化表达和净化过程是成本效益高的胰岛素制造的关键.
研究的目的:
- 在大肠杆菌BL21 (DE3) 中优化复合His标记的益胰岛素的生产.
- 为了确定影响亲胰岛素产量的关键细菌培养因子,使用Taguchi L8直角阵列.
- 为复合胰岛素开发一个高效的净化策略.
主要方法:
- 使用Taguchi L8直角阵列对细菌培养因子进行查.
- 在优化的条件下,His标记的益胰岛素的表达.
- 使用一种新型固定金属离子亲和染色学 (IMAC) 序列顺序的净化.
主要成果:
- 确定了影响亲胰岛素产量的关键因素:诱导后的温度,IPTG度,诱导前的温度,葡萄糖度,细胞密度和收获时间.
- 在优化条件下达到254.5±11.7μg/ml的最大亲胰岛素度.
- 通过使用新型IMAC净化和柱上裂解方法获得高纯度胰岛素 (>96%通过SDS-PAGE).
结论:
- 该研究成功优化了E. coli中复合型亲胰岛素的生产和净化.
- 新的IMAC序列顺序提供了一种高效的单步方法,用于同时净化和C-/His-tag去除.
- 这种优化过程为大规模,经济高效的重组人体胰岛素生产提供了一个有前途的战略.
