对验证抗原特异性B细胞ImmunoSpot检测的理论和实践考虑.

科学领域:

• 免疫学 免疫学 免疫学
• 测试开发 测试开发

背景情况:

• B细胞ELISPOT/FluoroSpot (B细胞免疫点) 试验对于在外围血液单核细胞 (PBMC) 中检测罕见的抗原特异性B细胞具有价值.
• 这些测试越来越多地用于监管环境中的免疫监测.
• 目前,还没有标准化指导方针来资格和验证B细胞ImmunoSpot测定结果.

研究的目的:

• 为B细胞ImmunoSpot测定结果的合格和验证提出指导方针.
• 根据监管要求,调整现有的T细胞ImmunoSpot测试经验,用于B细胞测试.
• 在验证过程中解决B细胞测试的独特特征.

主要方法:

• 针对抗原特异性B细胞ImmunoSpot测定进行正式验证的简化协议的开发.
• 使用三个实验和每位捐赠者2.2 × 10^7 PBMC进行验证.
• 复合试验的验证,每个样本只需要1-2 × 10^6 PBMC.

主要成果:

• 一个精简的协议使B细胞ImmunoSpot检测的正式验证成为可能.
• 一种经过验证的多重检测准确量化了分泌各种抗体 (IgM,IgG,IgA,IgE) 的抗原特异性记忆B细胞.
• 检测需要最小的样本体积 (1-2毫升血液).

结论:

• 拟议的指导方针有助于验证B细胞ImmunoSpot测定用于受管制的免疫监测.
• 经过验证的多重复合B细胞ImmunoSpot试验提供了高含量数据,易于实施和可扩展性.
• 这些测试提供了PBMC的经济使用和广泛适用于各种抗原系统.