来自不同丝状真菌的转化活性细胞溶解体的开发,用于无细胞蛋白质合成
Stephanie Friedrich1, Marina Schramm1, Jan Kiebist2
1Institute of Biotechnology, Brandenburg University of Technology Cottbus-Senftenberg, Universitätsplatz 1, Senftenberg 01968, Germany.
Enzyme and microbial technology
|January 27, 2025
概括
纤维状真菌溶解物显示出无细胞蛋白质合成 (CFPS) 的巨大潜力. 针对Neurospora crassa溶解物的优化条件显著提高了蛋白质产量,使得非特异性过氧酶 (UPO) 的有效生产成为可能.
科学领域:
- 生物技术和合成生物学
- 分子生物学和生物化学 分子生物学和生物化学
背景情况:
- 无细胞蛋白合成 (CFPS) 为蛋白质生产提供了一个多功能平台.
- 丝状真菌具有有利于培养和蛋白质表达的特征.
- 非特异性过氧酶 (UPO) 是有价值的酶,具有多种工业应用.
研究的目的:
- 探索状真菌溶解物在无细胞蛋白质合成 (CFPS) 的潜力.
- 优化种植和溶解物制备条件,以提高蛋白质产量.
- 用真菌溶解物证明功能性UPO的成功无细胞表达.
主要方法:
- 使用记者蛋白 (GFP,火虫光酶) 选22种丝状真菌物种的体外翻译能力.
- 优化生长媒介和最有前途的候选人Neurospora crassa的准备条件.
- 来自Cyclocybe aegerita和Aspergillus niger的非特异性过氧酶 (UPOs) 的无细胞表达,使用优化的真菌溶解物.
主要成果:
- 在体外翻译检测出了22种真菌物种中的12种化物.
- 优化的N. crassa溶解剂制剂提高了火虫光酶的25倍和GFP的17倍的蛋白质产量.
- 来自C. aegerita和A. niger的功能性UPOs使用N. crassa lysates.成功合成.
结论:
- 纤维状真菌溶解酸是一种有前途且具有成本效益的无细胞蛋白质合成系统.
- 使用N. crassa溶解物的优化CFPS使功能UPO的高吞吐量生产成为可能.
- 这种方法促进了酶工程和优化,用于各种应用.
