一种基于酵母的反向遗传系统,用于生成编码第八个亚基因组RNA的HCoV-OC43记者病毒

科学领域:

• 病毒学 病毒学
• 分子生物学分子生物学
• 酵母遗传学 酵母遗传学

背景情况:

• 冠状病毒拥有大型RNA基因组,挑战传统的突变发生.
• 人类冠状病毒OC43 (HCoV-OC43) 是一种导致轻度呼吸道疾病的模型β冠状病毒.
• 酵母中的转化相关重组 (TAR) 对于操纵大型病毒基因组是有效的.

研究的目的:

• 为人类冠状病毒OC43 (HCoV-OC43) 开发一个更新的转变相关重组 (TAR) 组件和突变发生系统.
• 为了使HCoV-OC43的快速生成和修改,包括记者病毒.
• 促进对betacoronavirus生物学和宿主-病原体相互作用的研究.

主要方法:

• 从HCoV-OC43RNA合成的cDNA. 这是一个很好的例子.
• 产生了五个含有~7.2千亿个病毒基因组部分的等离子体.
• 在*Saccharomyces cerevisiae* (酵母菌) 中使用同源重组组合组装完整的病毒基因组.
• 获救的野生类型和光记者病毒 (OC43-mClover3-H2B,OC43-mRuby3-H2B,OC43-mCardinal).

主要成果:

• 成功组装和拯救了全长的HCoV-OC43等离子体.
• 产生了功能性野生型和记者病毒,包括OC43-mClover3-H2B.
• OC43-mClover3-H2B与参考菌株相似地复制.
• 记者病毒从新型亚基因组RNA中产生蛋白质,而不会删除病毒基因.

结论:

• 更新的HCoV-OC43反向遗传系统增强了对betacoronavirus生物学的研究.
• 该系统有助于生成记者病毒,用于监测病毒复制.
• 它加速了对宿主-病原体相互作用的研究和新型抗病毒药物的开发.