纯化和表征本质上有障碍的阿拉比多普西斯塔利亚纳蛋白 SOG1 的特征

科学领域:

• 植物分子生物学 植物分子生物学
• 转录因子研究 转录因子研究
• 对DNA损伤的反应反应

背景情况:

• SOG1 (NAC转录因子) 对于植物DNA损伤反应至关重要.
• 它具有结构化的NAC域和无序的C端域 (CTD).
• 了解SOG1的结构和功能需要可靠的重组蛋白表达.

研究的目的:

• 为了比较不同的表达和净化方法,全长的Arabidopsis thaliana SOG1.1.
• 描述纯化重组蛋白质的生物物理和功能性质.

主要方法:

• 在Sf9昆虫细胞和大肠杆菌BL21 (DE3) 中的重组蛋白表达.
• 使用可切割的SUMO可溶性标签对大肠杆菌表达进行净化.
• 循环二元化 (CD) 光谱和差分扫描热量计 (DSC) 稳定性.
• 用多角度光散射 (SEC-MALS) 进行尺寸排除色谱,用于二分化.
• 分析SEC用于评估蛋白质非球性.
• 电泳运动移位测定 (EMSA) 测定DNA结合活性.

主要成果:

• 昆虫细胞表达产生了潜在的化SOG1 (在T423),可能是活性的.
• 大肠杆菌表达与SUMO标签产生的非酸化,转录无活性的SOG1.1.
• 这两种制剂都在溶液中形成二元体,并且由于失调的CTD而非球状.
• 两种纯化的SOG1蛋白都显示出对SMR5促进体区域的DNA结合活性.

结论:

• 为了Arabidopsis SOG1.1,成功表达和净化方案已经建立.
• 失调的CTD显著影响SOG1的非球状结构.
• 来自昆虫和大肠杆菌的SOG1蛋白都是功能性的,结合目标DNA,验证了它们对进一步研究的有用性.