一种新的方法,用于半定量检测HPV16和HPV18mRNA的低成本,开源的度仪
Kathryn A Kundrod1,2, Mary E Natoli1, Chelsey A Smith1
1Department of Bioengineering, Rice University, Houston, TX, USA.
Analytical and bioanalytical chemistry
|February 7, 2025
概括
使用异热放大的新型,价格实惠的HPV mRNA测试为资源有限的环境中进行宫癌查提供了有前途的解决方案. 这种新型检测方法提供了准确的检测,有可能改善全球获得重要诊断工具的机会.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
- 公共卫生 公共卫生
背景情况:
- 由于实施查和诊断计划的挑战,宫癌发病率和死亡率在资源有限的环境中仍然很高.
- 高风险人类乳头瘤病毒 (HPV) mRNA是宫癌前期的敏感生物标志物,但目前的检测方法太昂贵和复杂,无法广泛使用.
- 迫切需要可访问,低基础设施的HPV检测,以全球打击宫癌.
研究的目的:
- 开发和验证一种使用最小基础设施检测HPV16和HPV18mRNA的新型半定量方法.
- 为适应和描述适合资源有限环境的RNA检测的异热逆转录酶复合酶聚合酶放大 (RT-RPA) 试验.
- 通过评估该试验在患者样本上的性能并优化成本和可移植性来评估该试验在临床诊断宫癌查方面的潜力.
主要方法:
- 开发了一种新的同热RT-RPA试验,用于半定量检测HPV16和HPV18mRNA,并进行实时光读取.
- 调整了从DNA检测到RNA检测的测试方法,以增加生物复杂性来表征其性能,并使用细胞系RNA确定检测的极限.
- 在患者样本上验证了HPV mRNA测定,并证明了成本降低策略,包括多重DNA检测,减少反应体积和使用便携式低成本仪器.
主要成果:
- 确定了从细胞系提取的RNA每次反应检测1000个HPV16或HPV18转录的检测极限.
- 在11个患者样本中测试RNA时,HPV16和HPV18mRNA测试显示91%的协议与金标准RT-qPCR一致.
- 证明成功检测HPVDNA的多重检测,将DNA和RNA的反应体积降低到5μL,并在便携式阅读器上验证了性能.
结论:
- 新型RT-RPA试验提供了一种灵敏,特异且具有成本效益的HPV mRNA检测方法,其基础设施要求最低.
- 这项技术有可能显著扩大全球对HPV检测的准入,特别是在资源有限的环境中.
- 进一步的开发,包括点的护理样本准备和更广泛的基因型检测,可以提高其在宫癌消除工作的实用性.
