优化的电穿孔缓冲器提高了成年牛肉纤维细胞的转染和主要编辑效率
Mingxuan Sheng1, Yuequan Zheng2, Kunlong Li1
1Henan University Kaifeng China; Henan Province Livestock Genome Editing and Biobreeding Engineering Research Center, School of Life Sciences, Henan University, Kaifeng 475004 China.
Gene
|February 8, 2025
概括
对成年牛耳纤维细胞 (BEFs) 的电穿孔优化提高了基因编辑效率. 降低缓冲透度可以改善转染和编辑,这对于畜牧养殖的进步至关重要.
科学领域:
- 动物生物技术动物生物技术
- 基因编辑技术的技术
- 提高畜牧业的改善
背景情况:
- 体细胞基因编辑和克隆在牲畜中提供了优越的特征保存,绕过杂交的遗传损失.
- 成人原始细胞与胎儿细胞不同,在转染和基因编辑方面存在挑战,需要优化方法.
- 编辑成体细胞的低产量需要进行广泛的编辑后查.
研究的目的:
- 为了优化成年牛耳纤维细胞 (BEFs) 的电穿孔条件.
- 通过使用主要编辑器 (PE) 在BEF中评估基因编辑的效率.
- 确定影响牛细胞电穿孔和基因编辑效率的因素.
主要方法:
- 通过改变电脉冲设置,等离子体剂量,细胞密度和缓冲度来优化BEFs的电穿孔.
- 用EGFP等离子体进行流细胞计,评估了转染效率.
- 首席编辑 (PE) 被雇用以准BEF中的MSTN位置.
主要成果:
- 使用150万个细胞和5微克EGFP等离子体的最佳电穿孔程序 (270V,10毫秒,10个周期) 最大化了传染.
- 降低电穿孔缓冲器的度显著提高了电穿孔和基因编辑效率.
- 与抑制cGAS-STING通路相关的效率提高.
结论:
- 确定了成年牛初级细胞的最佳电穿孔参数.
- 证明降低缓冲层透度是改善BEF电穿孔和基因编辑的关键.
- 这些发现为在成年牛体细胞中推进基因编辑应用提供了关键的见解.
