在SARS-CoV-2中检测亚基因组RNA,通过序列通道,RT-qPCR和电子显微镜评估复制和无活化
Talita da Silva França1, Juliana Fernandes Amorim da Silva2, Gabriella Christine Neves da Silva2
1Virological Technology Laboratory, Bio-Manguinhos/FIOCRUZ, Rio de Janeiro 21040-900, Brazil.
International journal of molecular sciences
|February 13, 2025
概括
亚基因组RNAs (sgRNAs) 表示活动的SARS-CoV-2复制. 使用RT-qPCR对sgRNA和RNA中间体进行量化,成功地将可活性病毒与非活化样本区分开来,在两次通过后确认了非活化.
科学领域:
- 病毒学 病毒学
- 分子生物学分子生物学
- 传染性疾病 传染性疾病
背景情况:
- 亚基因组RNAs (sgRNAs) 对于SARS-CoV-2蛋白质合成至关重要,并表明活跃的病毒复制.
- 在诊断和治疗方面,区分活跃的SARS-CoV-2复制和非活性的病毒颗粒至关重要.
研究的目的:
- 在SARS-CoV-2样本中量化sgRNA和负RNA中间体.
- 评估通过β-propiolactone (βPL) 失活的病毒样本中的病毒复制.
- 为了验证sgRNA作为活跃SARS-CoV-2复制的标记.
主要方法:
- 使用RT-qPCR量化基因组和亚基因组RNA (sgENV) 和RNA中间体 (ENV-).
- 无活化的SARS-CoV-2样本经历了五次盲目串行通道 (BS).
- 使用传输电子显微镜可视化病毒颗粒.
主要成果:
- 阳性对照在通道上保持了一致的病毒标位.
- 在无活化样本中第二次通过后,sgENV是无法检测的,这表明成功无活化.
- 复制动力学显示了活跃与非活跃病毒的不同概况,sgRNA缺失与非活化相关.
结论:
- sgRNA作为活跃SARS-CoV-2复制的可靠标记.
- 通过RT-qPCR对sgRNA和RNA中间体的量化,可以区分活性的病毒和非活性的病毒.
- 这些发现支持开发针对病毒复制的诊断和治疗策略.
