基于RT-RPA辅助的CRISPR/Cas12a,用于对泛登革热病毒进行一次性快速和视觉检测
Pooja Bhardwaj1, Preeti Dhangur1, Alagarasu Kalichamy2
1JE-AES Apex Laboratory, ICMR-Regional Medical Research Centre, BRD Medical College Campus, Gorakhpur, India.
Journal of medical virology
|February 14, 2025
概括
一种新的CRISPR/Cas12a试验可以快速检测出所有四种登革热病毒 (DENV) 血清型,为资源有限的环境提供了至关重要的诊断工具. 这种临床检测有助于早期治疗,并减少了全球登革热的负担.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 病毒学 病毒学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 登革热病毒 (DENV) 构成严重的全球健康风险,数十亿人处于潜在风险和频繁的季节性疫情之中.
- 目前DENV的分子诊断方法在资源有限的环境中 (RCS) 往往是不切实际的.
- 准确及时诊断对于管理与未诊断的DENV感染相关的严重发病率和死亡率至关重要.
研究的目的:
- 为所有四种DENV血清型 (Pan-DENV) 开发一个简单,快速和灵敏的光检测平台,适合RCS.
- 为了实现DENV感染的早期诊断和差异诊断,支持及时治疗患者.
主要方法:
- 使用逆转录酶复合酶聚合酶放大 (RT-RPA) 和CRISPR/Cas12a技术开发一个光检测平台.
- 针对特定的DENV基因 (DENV-1,2,3的NS1;DENV-2的E) 和用于CRISPR/Cas12a检测的血清型特定crRNA的设计.
- 使用合成RNA和DENV基因组确定分析灵敏度,随后使用AES/AFI患者样本进行临床验证.
主要成果:
- 在CRISPR/Cas12a试验中,成功检测出所有四种DENV血清型 (1-4) 在单一反应中具有高分析灵敏度 (从fg到pg级别).
- 使用76个样本的临床验证显示了93.7%的灵敏度,100%的特异性和98.7%的整体准确性,与RT-PCR相比.
- 该试验没有表明与其他引起类似临床表现的病因因子 (AFI/AES) 的交叉反应.
结论:
- 开发的基于CRISPR/Cas12a的光检测平台为Pan-DENV诊断提供了一个快速,准确和用户友好的方法.
- 它的适用性作为在资源有限的环境中进行护理点测试,可以显著降低医疗负担并改善患者的治疗结果.
- 该试验的现场部署可以促进对登革热患者的差异诊断和及时开始治疗.
