来自Mycobacterium tuberculosis的谷氨酸脱碳酶 (Rv3432c) 的克隆,表达,净化和表征
Rupal Rai1, Ruchi Paroha2, Sandesh Rai3
1Molecular Signalling Lab, Department of Biological Sciences and Engineering, Maulana Azad National Institute of Technology Bhopal, Bhopal, M.P, India.
概括
这项研究检测出了Mycobacterium tuberculosis (Mtb) 和Mycobacterium smegmatis (MS) 中的谷氨酸脱碳酶 (Gad) 活性,这表明Mtb中可能存在Gad依赖的抗酸机制.
科学领域:
- 微生物学 微生物学
- 酶学 是一种酶学.
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- 谷氨酸脱碳酶 (Gad) 是一种依赖于酸5'-酸盐 (PLP) 的酶,通过将谷氨酸转化为γ-氨基黄油酸 (GABA),对细菌的细胞内pH稳定至关重要.
- 在菌根菌中的作用和存在,特别是 Mycobacterium tuberculosis (Mtb),尚不清楚.
研究的目的:
- 调查和描述Gad活动及其在Mycobacterium tuberculosis (Mtb) 内的抗酸性中的潜在作用.
主要方法:
- 在活的Mtb和Mycobacterium smegmatis (MS) 细胞和细胞溶解物中检测Gad活性和GABA.
- 使用Mycobacterium smegmatis作为宿主进行Mtb gadB基因和GadB蛋白的克隆,表达和净化.
- 纯化重组GadB的酶特性,包括pH和温度的最佳值,以及PLP的依赖性.
主要成果:
- 在Mtb和MS中证实了Gad活性和GABA.
- 再组合的Mtb GadB被成功过度表达并从MS中净化,表现出酶活性.
- 纯化GadB在中性和酸性pH均表现出活性,在pH7.2和50°C具有最佳活性,并且依赖于PLP.
结论:
- 这些发现表明,在各种pH条件下,Gad表达为Mtb.
- 这表明潜在的Gad-依赖的抗酸机制有助于Mtb在酸性环境中的生存.
