新型穿式表达载体的构建和表征,用于Actinobacillus succinogenes
Angélica Vallejo-Giraldo1, Luz María Martínez1, Noemí Flores1
1Departamento de Ingeniería Celular y Biocatálisis, Instituto de Biotecnología, Universidad Nacional Autónoma de México, Cuernavaca, Morelos, Mexico.
Biotechnology and applied biochemistry
|February 17, 2025
概括
为Actinobacillus succinogenes创造了新的穿表达载体,Actinobacillus succinogenes是生产酸的重要微生物. 这些载体促进了基因操纵,使得基因表达和生物技术应用得到改善.
科学领域:
- 微生物学 微生物学
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 阿克蒂诺巴西勒斯 (Actinobacillus succinogenes) 是一种关键的反动物微生物,用于生产酸.
- 有限的分子工具阻碍了对A. succinogenes的遗传研究和应用.
- 开发新的表达载体对于推进研究和生物技术至关重要.
研究的目的:
- 在A. succinogenes中生成和描述用于基因转移和表达的新型穿表达载体.
- 通过改进的基因操纵,提高目标分子的生产能力.
- 为A. succinogenes研究社区提供必要的分子工具.
主要方法:
- 构建了两个新的穿表达载体,pAVPtrc和pAVPmdh,其起源来自A. succinogenes,Pasteurellaceae和E. coli.
- 包括甲乙转移酶 (catA) 作为选择标记物和可诱导或原生促进物.
- 将马酸脱酶 (MDH) 基因 (mdh) 克隆到载体中,以创建pAVPtrcmdh和pAVPmdhmdh,用于促进体活性评估.
主要成果:
- 这两种新型载体,pAVPtrc和pAVPmdh,都成功构建和表征.
- 使用IPTG诱导的Ptrc促进子 (pAVPtrcmdh) 来表达mdh基因,MDH活性增加了2倍,转录水平增加了22倍.
- 使用原生Pmdh促进体 (pAVPmdhmdh) 的表达导致MDH活性增加4倍,转录水平增加19倍.
- 对所有构造的载体,等离子体拷贝数被确定为每个细胞的7-9个拷贝.
结论:
- 新型穿载体pAVPtrc和pAVPmdh是A. succinogenes基因克隆和表达的有效工具.
- 有特征的促进器系统允许显著增强基因表达,促进生物技术应用.
- 这些载体代表了A. succinogenes基因工程的宝贵进步,支持其生物技术潜力.
