使用His-tag对外毛细胞运动蛋白质前蛋白的亲和性净化
Manabu Inaba1, Hisashi Sugimoto2, Tomokazu Yoshizaki2
1Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, Kanazawa University, Kanazawa, Japan; Faculty of Frontier Engineering, Institute of Science and Engineering, Kanazawa University, Kanazawa, Japan.
Auris, nasus, larynx
|February 19, 2025
概括
研究人员开发了一种简化的方法来表达和净化听力关键蛋白质 - - 普雷斯. 这种新系统使用中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞和Hi-tag,从2.0×10^9细胞中产生78.7μg的纯化前列蛋白.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 神经科学是一个神经科学.
背景情况:
- 哺乳动物的听力依赖于外部毛细胞 (OHC) 身体运动.
- OHC 运动是由位于 OHC 侧面血中的运动蛋白质前蛋白驱动的.
- 了解普雷斯的结构和功能至关重要,需要高效的表达和净化系统.
研究的目的:
- 开发一套简化的表达和净化系统,用于精.
- 为了克服当前膜蛋白协议的复杂性,使用HEK293细胞.
- 建立一个可靠的方法来获得功能性预先准备,用于进一步的研究.
主要方法:
- 带有C端6×His标签的Gerbil prestin被转移到中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞中.
- 在G418处理和限制稀释后,选择了表达高水平普雷斯的稳定细胞系.
- 隔离了膜分离物,并使用针对His-tag的亲和力色谱净化了普雷斯.
主要成果:
- 西部涂抹证实了在选择的CHO细胞系中大约100kDa的前列素表达.
- 3C8细胞系表现出最高的普雷斯表达强度.
- 从2.0 × 10^9的CHO细胞中获得了78.7μg的纯化素的产量.
结论:
- 建立了一个简单有效的系统来表达和净化CHO细胞中的6×His标记的前列素.
- 这种方法提供了显著的净化普雷斯产量,促进了进一步的结构和功能研究.
- 开发的系统为膜蛋白研究的复杂现有协议提供了替代方案.
