使用表达光蛋白和光酶的双报告器系统对蛋白质溶解向嵌合体进行快速和高通量选
Shuai Meng1, Yuan Meng2, Xuena Yang2
1Department of Pharmacy, Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital, National Clinical Research Center for Cancer, Tianjin'S Clinical Research Center for Cancer, Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy, Tianjin, 300060, China.
BMC biology
|February 21, 2025
概括
这项研究引入了一种新的双报告器系统,用于高通量选蛋白质溶解向嵌合体 (PROTACs). 该方法有效地识别了PROTAC候选药物,加速了针对蛋白降解的药物发现.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 药物发现 药物发现 药物发现
背景情况:
- 针对蛋白质溶解的嵌合体 (PROTACs) 提供了一个针对蛋白质降解的新策略.
- 目前用于PROTAC选的方法,如西方抹杀,在吞吐量方面面临限制.
- 需要高效,高通量的方法来加快PROTAC的发展.
研究的目的:
- 开发和验证用于选PROTACs的高通量双报告器系统.
- 评估开发的系统在识别向雄激素受体 (AR) 和Sirtuin 2 (SIRT2) 的PROTACs方面的有效性.
主要方法:
- 使用Renilla luciferase (RLUC) 融合的目标蛋白和增强的绿色光蛋白 (EGFP) 作为参考,构建了一个双报告器系统.
- 光和发光信号使用基于板式读取器进行测量.
- 该系统的可行性使用已知的AR向PROTAC (ARV110) 得到验证,随后应用于选SIRT2降解剂.
主要成果:
- 双报告器系统证明了ARV110对AR的剂量依赖性降解,与西部斑点结果相关.
- 该平台成功地从一个小型库中识别了两个强大的SIRT2降解剂 (化合物128和129).
- 这些化合物诱导了内源性SIRT2的剂量依赖性降解和MCF-7细胞中的细胞生长停止.
结论:
- 一个结合光和化学发光用于PROTAC查的新型双报告器系统已成功建立.
- 这种方法有效地识别了针对SIRT2.2的有力PROTAC候选物.
- 开发的双报告器系统有可能显著加速PROTACs的药物发现过程.
