微流液体染色学与多喷嘴电喷离子相结合,以改善脂管学3D透明细胞脏细胞癌的覆盖

科学领域:

• 分析化学 分析化学
• 生物化学 生物化学
• 质谱测量质量谱测量

背景情况:

• 高分辨率质谱 (HRMS) 与电子喷射电离 (ESI) 相结合,是生物分析实验室的标准,通常使用分析流 (AF) LC.
• 由于矩阵效应和离子抑制,AF/ESI-HRMS方法在检测低丰度或弱电离性分析物时面临局限性.
• 纳米流ESI提供了更高的灵敏度和减少的矩阵效应,这对于全面的脂质学分析至关重要.

研究的目的:

• 开发和评估一种新型的微流 (μF) 液态染色学设置,配备多喷嘴电喷射 (mnESI) 发射器,用于非向的HRMS脂管学.
• 与传统的AF/ESI-HRMS相比,评估μF/mnESI-HRMS平台在灵敏度,脂质覆盖率和可重现性方面的性能.
• 在3D透明细胞脏细胞癌 (ccRCC) 模型中应用提升的脂质分析平台.

主要方法:

• 将微流 (μF) 染色系统与一种新型微制造的多喷嘴喷射器 (mnESI) 发射器 (五个喷嘴,每个600nL/min) 结合起来.
• 使用HRMS进行非定向的脂质组分析.
• 验证该方法使用脱脂标准并将其应用于多药疗法下的3DccRCC模型.

主要成果:

• 与AF/ESI相比,μF/mnESI设置实现了检测脂质标准的中位数增加16倍.
• 在ccRCC样本的脂质分析中,发现了1270个MS2标注脂质与μF/mnESI相比,752个是AF/ESI.
• μF/mnESI显示出优异的可重复性 (762个脂质<10%的变异),并使ccRCC模型中能够检测出新的脂质物种.

结论:

• 开发的μF/mnESI-HRMS平台显著提高了针对非向性脂类体的灵敏度和脂质覆盖率.
• 这种方法克服了AF/ESI-HRMS的局限性,使得低丰度和弱电离性脂质的更全面的分析成为可能.
• 该方法对推进诸如ccRCC等复杂疾病中的脂质生物标志物发现有前途.