工程接收器捕获与质谱学相结合,使得SARS-CoV-2尖端蛋白的高通量检测和定量成为可能
Neil Bate1, Dan Lane1,2, Sian E Evans3
1Department of Cardiovascular Sciences, University of Leicester, University Road, Leicester, Leicester LE1 7RH, U.K.
JACS Au
|February 28, 2025
概括
工程设计的ACE2受体捕获SARS-CoV-2尖端蛋白,提高质谱 (MS) 检测灵敏度. 这种方法改善了病毒诊断,特别是低度样本.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分析化学 分析化学
- 病毒学 病毒学
背景情况:
- 质谱学 (MS) 对病毒诊断有前途,但在复杂样本中难以达到低抗原度.
- 基于病毒受体的捕获可以克服MS病毒检测的敏感性限制.
研究的目的:
- 开发和评估工程病毒受体,以增强捕获和MS检测SARS-CoV-2尖端蛋白.
- 使用质谱仪提高病毒检测的灵敏度和效率.
主要方法:
- 针对ACE2的蛋白质进化,以增加对SARS-CoV-2尖端蛋白受体结合域 (RBD) 的结合亲和力.
- 工程原生ACE2与一个寡合化支架,以创建 pentameric ACE2 增强RBD结合.
- 固定多重体ACE2用于从唾液中定量丰富尖端蛋白质.
- 使用质谱法进行检测和量化.
主要成果:
- 工程 ACE2 变种显示了对 RBD 的结合亲和力增加,但注意到对 RBD 突变的敏感性.
- 与单体ACE2相比,Pentameric ACE2表现出明显更高的表面亲和力 (几千倍) 和长时间的RBD保留 (>8小时) .
- 固定多重体ACE2可有效定量丰富唾液中的尖端蛋白,提高MS检测灵敏度.
结论:
- 与MS结合的工程多重体ACE2受体提供了一种快速而灵敏的病毒蛋白检测和定量方法.
- 这种增强捕获的MS方法具有诊断病毒感染的潜力,并且可以适应其他病毒附着蛋白或点分子.
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