产生NGN2 iPSC线路和大规模人类神经元生产的协议
Xiwei Shan1, Amber L Cramer1, Claire G Jeong1
1Department of Neuroscience, Genentech Inc., South San Francisco, CA 94080, USA.
STAR protocols
|March 1, 2025
概括
本研究介绍了一种方法,用于大规模生产诱导多能干细胞 (iPSC) 衍生神经元,使用可诱导多西环素的NGN2磁带. 这种可扩展的方法对于推进疾病建模和药物发现工作至关重要.
科学领域:
- 干细胞生物学 干细胞生物学
- 神经科学是一个神经科学.
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 诱导多能干细胞 (iPSC) 衍生神经元的大规模生产对于疾病建模和药物发现至关重要.
- 现有的方法可能缺乏可扩展性或广泛应用的效率.
研究的目的:
- 开发和验证一个强大的工作流程,用于设计iPSC来产生大量的神经元.
- 为研究应用优化神经元细胞高效生成过程.
主要方法:
- 在 iPSCs 的 AAVS1 位点中引入一个可诱导多西环素的 NGN2 磁带的工程.
- 使用核糖核蛋白电穿孔和供体等离子体进行基因改造.
- 采用同质导向修复增强,抗生素选择和光用于克隆验证.
主要成果:
- 在5天内成功将验证的iPSC克隆分化为神经元.
- 在数十亿个神经元的规模上实现了生产.
- 证明了衍生神经元的冷保存和长期维护能力.
结论:
- 描述的工作流允许高效的大规模生产iPSC衍生神经元.
- 这种方法显著支持疾病建模和制药药物发现的应用.
- 生成的神经元是稳定的,适合各种下游实验程序.
