在HEK293悬浮电池系统中,可扩展的ARRDC1-介导微粒的生产和净化

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 细胞生物学 细胞生物学
• 基因治疗 基因治疗

背景情况:

• 非病毒基因传递载体对于新的治疗策略至关重要.
• 工程细胞衍生的囊泡,如ARRDC1-介导的微囊泡 (ARMMs),提供了作为治疗输送系统的潜力.
• 需要可扩展的生产方法来将ARMM转化为临床应用.

研究的目的:

• 评估可扩展的战略,以生产装载蛋白质货物的ARMM.
• 为了比较ARMMs的过渡转染和基于稳定细胞系的生产方法.
• 评估工程ARMMs的净化,表征和体内行为.

主要方法:

• 在ARMMs生产中使用了适应悬浮的HEK293衍生细胞系 (5B8).
• 在震动瓶和生物反应器中采用过渡性转染和稳定细胞系方法.
• 使用超离心 (小规模) 和触流过/离子交换染色学 (可扩展) 纯化的ARMM.

主要成果:

• 这两种生产策略都产生了强大的ARMM,其尺寸和有效载荷相似.
• 单粒子分析表明,大约50%的ARMM含有有效载荷.
• 在小鼠体内研究显示,和肝脏的生物分布很快,血半衰期为6±0.4分钟.

结论:

• 开发并验证了ARMMs生产和净化的可扩展方法.
• 证明了使用工程ARMM用于体内输送的可行性.
• 这项工作推进了细胞衍生囊泡的潜力,用于未来的治疗分子输送.