结合FLIM,共聚焦显微镜和STED纳米镜用于活细胞成像

科学领域:

• 细胞生物学 细胞生物学
• 显微镜技术的使用方法
• 生物光子学 生物光子学

背景情况:

• 活细胞成像需要平衡可视化,尽量减少光毒性.
• 在长期实验中,开发强大的协议对于维持细胞健康至关重要.
• 先进的显微镜提供了增强的分辨率,但需要仔细的参数优化.

研究的目的:

• 为优化活细胞光成像提供全面指南.
• 详细介绍减少光引起的细胞应激和最大限度地提高细胞存活的策略.
• 通过使用先进的显微镜,实现细胞动态的高分辨率可视化.

主要方法:

• 使用时间间隔光显微镜与膜间皮细胞系 (H28).
• 采用红色和近红外探测器,具有低细胞毒性和被动膜透.
• 优化了先进的共聚焦激光扫描显微镜参数,包括白激光,STED纳米镜,混合探测器和快速FLIM模块.
• 应用终身分析技术,包括终身成像,染料分离和消噪.

主要成果:

• 开发了一种标签协议,平衡探头度和化时间,用于多重标签.
• 实现了具有良好的空间和时间分辨率的长期时隔采集.
• 证明了使用基于FLIM的不混合方法对光谱相似的染料进行成功的多重标签.
• 在与FLIM相结合的对焦STED图像中增强了信号噪声比.

结论:

• 开发的策略在活细胞光成像过程中有效地保持细胞活力.
• 先进的显微镜,结合优化的探针和协议,允许详细研究细胞动态.
• 在复杂的活细胞实验中,基于FLIM的分析提供了多重复和提高图像质量的灵活性.