液体染色体质谱蛋白质量定量的智能蛋白质溶解采样器:通过二维尼尔硫或周期性功能化评估素固定

科学领域:

• 分析化学 分析化学
• 生物化学 生物化学
• 材料科学 材料科学 材料科学

背景情况:

• 在各种科学领域中,定量蛋白质的确定是至关重要的.
• 基于纸张的分析设备提供了低成本,便携式诊断的潜力.
• 在固体支上的酶固定是开发高效分析工具的关键.

研究的目的:

• 用LC-MS评估智能蛋白质分析采样器对纸质蛋白质量定量的有效性.
• 为了比较两种功能化策略 (二维尼尔硫和周期酸) 用于在纤维素纸上固定素.
• 评估使用这些样本获得的蛋白质测量的线性和可重复性.

主要方法:

• 通过两阶段的工艺生产智能蛋白质溶解采样器:纤维素功能化和共价素结合.
• 比较divinyl硫和周期性功能化方法用于试固定.
• 使用LC-MS对蛋白质 (BSA,Cytochrome C) 的定量分析,采用特定的蛋白型.

主要成果:

• 在瓦特曼等级CF12纸上成功生产了具有高基活性的智能蛋白质溶解样本.
• 迪维尼尔硫和周期性功能化策略在素固定中表现出相似的成功.
• 在缓冲溶液中,BSA (R2=0.998) 和细胞染色体C (R2=0.990) 的线性非常好.
• 在具有内部校正的复杂生物样本中观察到可接受的可重现性 (<20%的平均RSD).

结论:

• 智能蛋白质溶解样本是可行的工具,可直接从纸上基于LC-MS的可靠定量蛋白质确定.
• 新的divinyl sulfone功能化方法证明了对素不动化的有效性.
• 选择适当的蛋白型对于使用这种方法准确量化蛋白质至关重要.