在初级人类免疫细胞和造血干细胞中,用于CRISPR工程 (PERC) 的基核蛋白输送
Srishti U Sahu1,2,3, Madalena Castro1,2,3, Joseph J Muldoon4,5
1Innovative Genomics Institute, University of California Berkeley, Berkeley, CA, USA.
Nature protocols
|March 3, 2025
概括
为CRISPR工程 (PERC) 提供支持的核糖蛋白传递,可在人体细胞中提供高效的ex vivo基因组编辑. 这种新的方法在没有专门的设备的情况下实现了高的编辑效率,保持了细胞活力和表型.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 基因编辑技术的技术
背景情况:
- 克里斯普尔-卡斯核糖核蛋白 (RNP) 复合体被广泛用于基因组工程.
- 能有效和温和地将RNP输入人类初级细胞仍然是ex vivo应用的挑战.
研究的目的:
- 为CRISPR工程 (PERC) 引入支持的核蛋白输送,作为一种用于ex vivo基因组编辑的新方法.
- 评估PERC在人类初级细胞中的效率,安全性和易用性.
主要方法:
- PERC使用单一的两性来将预先形成的CRISPR-RNP复合体输入细胞.
- 该协议涉及将CRISPR-RNP与质混合,并与培养细胞进行化,可选地包括腺相关病毒 (AAV) 同源导向修复模板 (HDRT) 的DNA用于敲进.
- 在效率,细胞活力和表型影响方面,PERC与电泳相比较.
主要成果:
- PERC实现了高效的基因淘汰,精确的转基因淘汰,以及在刺激的免疫细胞和造血干细胞和原生细胞 (HSPC) 中进行基因编辑.
- 在初级T细胞和HSPC中观察到Cas9或Cas12a的编辑效率超过90%.
- PERC对细胞表型和活力的影响最小,允许多个递送轮,而不会显著降低细胞健康.
结论:
- PERC提供了一种简单,独立于硬件的,温和的方法,用于在人类初级细胞中高效的CRISPR基因组工程.
- 该协议的简单性和与现有的细胞工程管道的兼容性使其适合在研究和临床环境中快速部署.
