在哺乳动物细胞中表达重组组织等离子体激活剂-等离子体激活剂抑制剂复合物,作为免疫试验中的质量控制材料

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 蛋白质工程是指蛋白质工程.
• 测试开发 测试开发

背景情况:

• 组织等离子素激活剂-等离子素激活剂抑制剂复合体 (tPAIc) 是纤维解质功能障碍的一个关键生物标志物.
• 目前用于tPAIc免疫测试的质量控制材料 (QCM) 是从人体血中衍生出来的,存在几个缺点.
• 再组合蛋白为tPAIc QCMs提供了一个有希望的替代来源.

研究的目的:

• 为免疫测试应用开发高性能复合tPAIc质量控制材料 (QCM).
• 为了克服与表达三组分tPAIc蛋白质复合体相关的挑战.

主要方法:

• 构建了编码tPA-A,tPA-B和PAI-1的三个重组等离子体.
• 与等离子体一起共传染的HEK293F细胞以最佳的摩尔比率 (1:1:1).
• 使用西部斑块和化学发光免疫测试 (CLIA) 净化和表征了自我组装的复合tPAIc复合体.

主要成果:

• 在细胞上位物中成功获得重组tPAIc,约为6500 ng/mL.
• 在50 ng/mL和5 ng/mL的度下开发出冷化QCM.
• 证明了出色的同质性,稳定性 (在4°C和-20°C至少1年),以及重组tPAIc QCMs的恢复.

结论:

• 成功生产了高质量的重组tPAIc QCMs,为血衍生材料提供了优质的替代品.
• 这些重组QCM对tPAIc免疫试验具有出色的性能特征.
• 该开发为复合蛋白复合体的更广泛应用提供了宝贵的见解.