基于重组抗体的非溶解性肠毒素的精确和敏感检测:侧流免疫染色学试验和探索识别机制

科学领域:

• 食品安全和微生物学
• 免疫技术和诊断方法
• 生物化学和分子生物学.

背景情况:

• 谷菌 (B. cereus) 是一种重要的食源性病原体,产生肠毒素.
• 准确和快速检测B. cereus的肠病原性潜力对于食品安全至关重要.
• 非溶血性肠毒素A (Nhe A) 是由B. cereus.产生的一个关键的肠毒素.

研究的目的:

• 为Nhe A.开发敏感和特定的检测方法.
• 为了制造针对Nhe A.的单克隆抗体 (mAbs).
• 为Nhe A检测建立酶相关的免疫吸收试验 (ELISA) 和侧流免疫染色学试验 (LFIA) 平台.

主要方法:

• 重组Nhe A抗原的表达和净化.
• 产生针对Nhe A.的单克隆抗体 (mAbs).
• 开发双抗体三明治ELISA (DAS-ELISA) 和侧流免疫染色学 (LFIA) 试验.
• 基因测序,克隆和复合抗体 (rAbs) 的表达.
• 分子对接和分子动力学 (MD) 模拟用于抗原-抗体相互作用.

主要成果:

• 已建立的DAS-ELISA检测极限 (LOD) 为0.35 ng/mL,用于牛奶中的Nhe A.
• 实现了高产量 (100 mg/L) 的复合抗体 (rAbs) 与优化的等离子体比率.
• 开发了LFIA,在牛奶中截止LOD (cLOD) 为2.6 ng/mL,在蔬菜中为3.28 ng/mL.
• 分子模拟揭示了键在抗原-抗体结合中的重要性.

结论:

• 开发的DAS-ELISA和LFIA提供了对Nhe A.的敏感和特定检测.
• 重组抗体平台适用于在各种食品样本中快速检测B. cereus.
• 这项研究有助于加强食品安全措施,防止B. cereus污染.