在使用LC-ESI-Orbitrap-MS进行的非向植物代谢物质的比较量化中,准确性,线性和统计差异.
Christina Maisl1, Rainer Schuhmacher1, Christoph Bueschl2
1Department of Agrobiotechnology IFA-Tulln, Institute of Bioanalytics and Agro-Metabolomics, BOKU University, Vienna, Tulln, 3430, Austria.
Analytical and bioanalytical chemistry
|March 11, 2025
概括
使用Orbitrap质谱的非向代谢学揭示了广泛的非线性反应. 方法验证至关重要,因为低度样本中的高估值可能会增加代谢物发现中的假阴性.
科学领域:
- 分析化学 分析化学
- 生物化学 生化学
- 代谢学 代谢学 代谢学
背景情况:
- 高分辨率质谱仪,特别是 Orbitrap 仪器与液态色谱相结合,对于非目标代谢学至关重要.
- 虽然提供高灵敏度和质量准确度,但这些仪器存在量化挑战,需要严格的方法验证.
- 非定位代谢学需要对广泛的动态范围内的众多代谢物进行可靠的检测和量化.
研究的目的:
- 评估非定位代谢学方法对基于发现的研究的适用性.
- 通过使用Q Exactive HF Orbitrap来评估代谢物量化的线性和可靠性.
- 调查非线性反应对代谢学数据解释的影响.
主要方法:
- 使用稳定同位素辅助策略进行定量分析.
- 使用Q Exactive HF Orbitrap质谱仪分析小麦提取物.
- 采用九个稀释级别来评估广泛度范围内的代谢物反应线性.
主要成果:
- 在1327个检测到的代谢物中,很大一部分 (70%) 在9个稀释级别中表现出非线性行为.
- 在47%的代谢物 (8倍差异) 的至少四个稀释水平中观察到线性.
- 非线性反应往往导致低度的代谢物丰度过高估计,可能增加虚假阴性.
结论:
- 代谢物量化的广泛非线性需要对非目标代谢物质进行仔细的方法验证.
- 在线性范围之外的样本中过度估计丰度可能会影响统计分析,可能会增加错误负数.
- 基于化合物类或极性,非线性行为不容易预测,这突显了经验评估的必要性.


