对Saccharomyces boulardii的二叶酸还原酶选择系统的开发

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 生物技术是生物技术.
• 基因工程是一种基因工程.

背景情况:

• 糖菌 (Saccharomyces boulardii) 是一种益生菌酵母,作为胃肠道疾病的活生物治疗产品 (LBP) 被探索.
• 为了临床应用,S. boulardii的基因修饰面临着监管和技术上的障碍.
• 酵母工程现有的选择策略可能是繁的,并限制治疗性蛋白质表达.

研究的目的:

• 开发一种创新的选择系统,用于设计Saccharomyces boulardii.
• 为了克服与传统的auxotrophic选择方法相关的挑战.
• 建立一个生产重组活生物疗法的多功能平台.

主要方法:

• 开发了一种基于二叶酸减少酶 (DHFR) 的选择系统,用于S. boulardii.
• 加入硫胺来提高对甲基酸盐 (MTX) 耐药性的选择效率.
• 使用内源性DHFR同源物DFR1作为选择标记物.
• 调节的MTX度来控制治疗性蛋白质表达水平.

主要成果:

• 该DHFR选择系统在工程S. boulardii中表现出强大的功能.
• 实现了高表达克隆对治疗性蛋白质生产的有效选.
• 成功证明了异质蛋白的可调节表达,包括细胞因子和抗体.
• 内生DFR1标志物提供了宿主兼容性,并保持了选择功能.

结论:

• DHFR/DFR1选择系统提供了一个创新的替代方案,与传统的auxotrophic选择.
• 这种系统简化了S. boulardii的工程,用于活体生物治疗应用.
• 它使得治疗性蛋白质可以在没有外来抗生素标记物的情况下进行可调的表达.
• 开发的系统作为一个强大的平台,用于推进基于S. boulardii的生物疗法.