极化剂AsymPolPOK在完整的和溶解的哺乳动物细胞中的稳定性

相关实验视频

Updated: May 22, 2025

Single Liposome Measurements for the Study of Proton-Pumping Membrane Enzymes Using Electrochemistry and Fluorescent Microscopy

Single Liposome Measurements for the Study of Proton-Pumping Membrane Enzymes Using Electrochemistry and Fluorescent Microscopy

Published on: February 21, 2019

Dominique Lagasca¹, Rupam Ghosh¹, Yiling Xiao¹

¹Department of Biophysics, UT Southwestern Medical Center, Dallas, TX 75390-8816, USA.

Journal of magnetic resonance (San Diego, Calif. : 1997)

|March 13, 2025

概括

一种新的DNP固态NMR代理,AsymPolPOK,显示出对细胞内蛋白质检测的希望. 然而,其在完整细胞中的有效性受到快速减少的限制,需要进一步开发生物耐药剂.

科学领域:

生物物理学的生物物理.
结构生物学结构生物学
核磁共振 (NMR) 光谱学核磁共振 (NMR) 光谱学

背景情况:

动态核极化 (DNP) 增强了固态NMR的灵敏度,用于研究生物分子.
氧化二基是DNP的关键极化剂,但它们在细胞环境中的表现具有挑战性.
AsymPolPOK是一种新型,水溶性双基,旨在提高DNP性能.

研究的目的:

在哺乳动物HEK293细胞中描述AsymPolPOK的行为.
在体外和完整细胞中评估AsymPolPOK的细胞分布,还原动力学和DNP性能.
评估传输方法和蜂环境对DNP效率的影响.

主要方法:

电穿孔用于AsimPolPOK的细胞输送.
在细胞内对AsymPolPOK还原动力学的光谱分析.
在细胞溶解物和完整的HEK293细胞中进行了DNP增强的固态NMR测量.

主要成果:

电穿孔使AsymPolPOK能够均地传递到HEK293细胞中,没有观察到细胞毒性.
在细胞环境中,AsymPolPOK经历了快速的降解到单基质,氧化物中心之间的降解速率不同.
在细胞溶解物中获得了高DNP增强,但在完整细胞中的性能对传递方法和暴露时间敏感,电穿孔性能优于化.

结论:

AsymPolPOK显示了细胞内DNP NMR应用的潜力.
在细胞环境中AsymPolPOK的快速减少限制了它在完整细胞中的有效性.
开发更具生物耐药性的极化剂对于使用DNP NMR进行细胞内结构生物学研究至关重要.

关键词:

在DNP NMR中,DNP NMR的作用是什么?在细胞EPR中.极化剂是一种极化剂.氧化物激素的使用.

更多相关视频

Inducible LAP-tagged Stable Cell Lines for Investigating Protein Function, Spatiotemporal Localization and Protein Interaction Networks

Inducible LAP-tagged Stable Cell Lines for Investigating Protein Function, Spatiotemporal Localization and Protein Interaction Networks

Published on: December 24, 2016

Fluorescence-Based Measurements of Phosphatidylserine/Phosphatidylinositol 4-Phosphate Exchange Between Membranes

Fluorescence-Based Measurements of Phosphatidylserine/Phosphatidylinositol 4-Phosphate Exchange Between Membranes

Published on: March 14, 2021

相关概念视频

Asymmetric Lipid Bilayer

Asymmetric Lipid Bilayer

Biological membranes show uneven distribution of different types of lipids in the inner and outer layers, resulting in transverse asymmetric membranes. The treatment of the erythrocyte membrane with the enzyme phospholipase confirmed the asymmetric nature of the lipid bilayer. The enzyme hydrolyzes lipids into fatty acids and hydrophilic groups. The phospholipase acts only on the outer layer of the membrane, while the inner layer remains intact. The phospholipase treatment resulted in 80%...