二维尺寸排除逆相液态染色学用于复杂疫苗基质中L1蛋白质的定量分析

科学领域:

• 生物制药制造业 生物制药制造业
• 疫苗开发 疫苗开发
• 分析化学 分析化学

背景情况:

• 定量主要囊蛋白L1对于人类乳头瘤病毒 (HPV) 疫苗生产至关重要,因为L1形成病毒样颗粒 (VLP).
• L1存在于多种状态 (单质,多质,VLP,聚合物),使得从原始溶解物到净化产品的各种样本矩阵中精确的测量变得复杂.
• 如紫外线,毛细管电泳和质谱等现有方法在制造环境中存在局限性,包括矩阵干扰,抗体可变性和部署挑战.

研究的目的:

• 开发一种强大的总L1量化分析方法,独立于其多重体状态,并与各种样本矩阵兼容.
• 建立一个可靠的方法,在整个生物制药制造过程中测量L1,从上游到下游.
• 为HPV疫苗生产过程的过程监测和质量控制提供准确和可重复的试验.

主要方法:

• 一种新的样本制备策略,涉及减少和热变性,将所有L1形式转化为单体.
• 二维液态色谱 (2D-LC) 采用尺寸排除色谱 (SEC) 在第一维 (1D) 采用峰心切割.
• 在第二维 (2D) 的反相色谱 (RPC),加上二极管阵列和光检测,用于敏感的量化.

主要成果:

• 开发的2D-LC方法成功量化了L1总蛋白质,不论其多分子状态如何.
• 该方法证明了与各种样本矩阵的兼容性,从复杂的细胞溶解物到纯化的中间体.
• 分析值的数据,包括量化的极限,线性和可重复性,被评估并确认用于过程监控.

结论:

• 这种2D-LC方法为HPV疫苗制造中的L1总量定量提供了一种可靠和多用途的方法.
• 该策略通过标准化其形式来简化L1分析,并有效地将其与矩阵组件分开.
• 经过验证的方法支持在基于VLP的疫苗生产中改善过程理解,生产率评估和净化效率监测.