开发和验证一种基于LC-MS/MS的新型蛋白质组学方法,用于定量视网醇结合蛋白4 (RBP4) 和转素 (TTR)

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 临床化学 临床化学
• 分析化学 分析化学

背景情况:

• 视网醇结合蛋白4 (RBP4) 是循环中的视网醇的主要载体,并与 transthyretin (TTR) 形成复合体.
• RBP4被认为是心脏代谢疾病的潜在生物标志物.
• 目前用于RBP4定量化的方法,如免疫测试和西部斑点,缺乏对视网醇和TTR的同时测量,限制了全面的生物标志物分析.

研究的目的:

• 开发和验证一种液体染色学-并联质谱法 (LC-MS/MS) 方法,用于同时绝对量化血清和血中的RBP4和TTR.
• 为了能够更深入地了解RBP4和TTR作为各种临床环境中的生物标志物.

主要方法:

• 使用了具有已确定的线性LC-MS/MS反应的替代,用于RBP4和TTR量化.
• 采用纯化蛋白质作为量化标准和重标签作为内部标准.
• 验证了使用组合人体血清和评估矩阵效应的方法.

主要成果:

• 在临床相关范围内的RBP4 (0.5-6μM) 和TTR (5.8-69μM) 的线性量化证明.
• 实现的日间变化率低于12%,测试内精度低于5%.
• 观察到RBP4和TTR的个体间变异性为18-26%,个体内变异性与检测精度相当.

结论:

• 开发的LC-MS/MS方法提供了从小样本体积中准确并同时量化RBP4和TTR.
• 这种方法支持临床生物标志物研究,营养维生素A状况评估,以及对RBP4-TTR-视网醇固态度的调查.