针对与ARPE-19细胞中与年龄相关的黄斑变性相关的SNP的CRISPR向:一种潜在的模型来操纵补体系统

科学领域:

• 遗传学 遗传学 是一个
• 眼科医生 眼科 眼科
• 分子生物学分子生物学

背景情况:

• 与年龄相关的黄斑变性 (AMD) 是导致视力丧失的主要原因,与特定的遗传风险因素如单核酸多态 (SNP) 相关.
• 补充系统和慢性炎症在AMD的发病过程中起着至关重要的作用,在补充基因中发现了许多相关的遗传变异.
• 由于其视网膜色素表皮质 (RPE) 特性和稳定的生长,ARPE-19细胞系为研究AMD提供了合适的模型.

研究的目的:

• 调查使用CRISPR介导的基因组编辑以针对ARPE-19细胞系内的ALLE特定方式针对AMD相关的SNP的可行性.
• 评估CRISPR构造的效率和特异性,旨在针对与AMD相关的补充基因中的特定SNP.
• 建立基于细胞的模型,通过精确修改与疾病相关的遗传变异来探索AMD的治疗策略.

主要方法:

• 在ARPE-19细胞中使用向PCR识别与AMD相关的SNP.
• 将指导RNA序列设计和克隆为用于CRISPR介导的基因组编辑的SpCas9晶状病毒载体.
• 通过下一代测序 (NGS) 评估使用TIDE分析和等位基因特异性的向效率,转导后30天.

主要成果:

• 对不同的导向RNA观察到可变的向效率,具体例子包括CFH SNP rs1061170的35.5%,rs1410996.8的33.8%.
• 对CFBSNP的CRISPR准效率在3%至36.7% (rs4541862) 和3.4%至23.8% (rs641153) 之间.
• 与AMD相关的SNP (rs1061170,rs1410996,rs4541862,rs641153) 的基因特异向,在异构卵性ARPE-19细胞中实现了48%至52%之间的率.

结论:

• 通过CRISPR介导的基因组编辑可以在相关的RPE细胞模型中以异位基因特定的方式有效地准与AMD相关的SNP.
• 这些发现证实了通过向与疾病相关的遗传变异来精确操纵补充系统的潜力.
• 这种方法为开发与年龄相关的黄斑退化症的新疗法提供了有希望的途径.