达林鼠标用于高效率和克隆多样性的体内血统追踪
Li Li1,2, Sarah Bowling3, Hongying Lin2
1Westlake Laboratory of Life Sciences and Biomedicine, Hangzhou, China.
Nature protocols
|March 22, 2025
概括
达林小鼠模型通过创造巨大的遗传条形码多样性,显著增强了血统追踪,使得超过70%的细胞能够详细研究细胞史和动态.
科学领域:
- 发展生物学 发展生物学
- 遗传学 遗传学 是一个
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 谱系追踪对于理解发育中的细胞动态和恒温至关重要.
- 目前的方法在较低的条形码多样性和有限的单细胞覆盖率方面扎.
- 由突变产生的遗传条形码是一种流行的谱系追踪方法.
研究的目的:
- 介绍并详细介绍DARLIN小鼠模型,用于先进的体内血统追踪.
- 克服现有的谱系追踪技术关于条形码多样性和细胞覆盖范围的局限性.
主要方法:
- 开发了DARLIN鼠标模型,使用三个条形码数组.
- 使用Cas9和终端脱核样转移酶 (TdT) 来增强编辑多样性.
- 以多西环素诱导的系统用于稳定的条形码生成.
- 协议包括条码诱导,效率估计和批量/单细胞测序分析.
主要成果:
- 在理论上,DARLIN可以生成10^18个不同的血统条形码.
- 在单细胞检测中,可在70%以上的细胞中恢复血统条形码.
- 在定义的阶段,在整个组织中提供稳定的血统条形码.
结论:
- 达林显著提升了体内血统追踪能力.
- 促进了对各种组织中血统关系和分子调节的全面研究.
- 提供的协议使得达林系统的有效应用成为可能.
