一种基于TREC和KREC的高通量新生儿查,以发现严重的先天免疫缺陷
Haruka Hiroki1, Kunihiko Moriya2, Toru Uchiyama3
1Department of Pediatrics and Developmental Biology, Graduate School of Medical and Dental Sciences, Tokyo Medical and Dental University (TMDU), Tokyo, Japan.
概括
一个新的定量PCR套件可以通过新生儿查,早期诊断严重的综合免疫缺陷 (SCID) 和B细胞缺陷 (BCD). 这种方法准确地检测T细胞受体 (TREC) 和卡帕删除复合 (KREC) 切除圆在干血斑点.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 遗传学 遗传学 是一个
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 严重的联合免疫缺陷 (SCID) 和B细胞缺陷 (BCD) 是严重的先天性免疫错误 (IEI),需要早期诊断.
- 延迟诊断可能导致致命的感染,即使是来自活疫苗.
- 新生儿查 (NBS) 对于早期识别这些疾病至关重要.
研究的目的:
- 开发和验证基于TaqMan的冷化定量PCR (qPCR) 工具包,用于同时检测T细胞受体切除圆 (TREC) 和卡帕删除重组切除圆 (KREC).
- 建立一个完全自动化的DNA提取和净化过程从干血斑点 (DBS) 高通量NBS.
- 评估在不同实验室环境中实施基于qPCR的NBS的可行性.
主要方法:
- 开发一套冷化qPCR套件,配备用于TREC和KREC检测的特定原料和探针.
- 在DBS上使用Magtration技术实现自动化DNA提取和净化协议.
- 分析了15258个存储的DBS样本和来自SCID,XLA和 - 脑膜异位症 (AT) 患者的阳性对照.
主要成果:
- 该试验显示了RPPH1 (内部控制),TREC和KREC的近正常分布.
- 一个样本显示TREC水平低于切断值 (0.00657%),由于DNA提取失败导致0.23%的排除.
- 患有AT和SCID的患者的TREC水平低于切断值或不存在,而患有AT和XLA的患者则显示KREC水平不存在或低于切断值.
结论:
- 开发的qPCR试验有助于在各种实验室中建立SCID和BCD的NBS.
- 通过这种经过验证的查方法,可以实现这些关键条件的早期诊断.
- 该试验的稳定性和自动化支持对T细胞和B细胞缺陷的高通量查.
