再组合溶解酸酸酶A的过度生产和表征Trypanosoma brucei

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分子生物学分子生物学
• 寄生虫学的寄生虫学

背景情况:

• 类酸酶A2 (TbPLA2) 是一种有效的药物标,用于治疗非洲和美国的类菌病.
• 之前试图表达可溶性重组TbPLA2的尝试因蛋白质不可溶性而受到阻碍.

研究的目的:

• 开发一种表达可溶性和活性重组TbPLA2.2的方法.
• 为了使得药物和疫苗的研发松病.

主要方法:

• 重组DNA技术被用于在大肠杆菌和牧羊中表达TbPLA2.
• 使用了具有标签 (FLAG,eGFP,mClover) 的融合蛋白策略.
• 截断的TbPLA2缺乏信号和跨膜域被表达和净化.
• 进行了包括SDS-PAGE和动力学研究在内的生化表征.

主要成果:

• 在大肠杆菌中表达的全长TbPLA2形成了不溶性包含体.
• 在P. pastoris和E. coli中使用融合蛋白获得可溶和活性TbPLA2.
• 截断的TbPLA2 (39 kDa) 被净化为同质性.
• 确定了运动参数:特定活性 (107.14μmol/分钟/毫克),Vmax (25.1μmol/分钟) 和KM (1.58毫米).

结论:

• 这项研究报告了第一个成功表达可溶性和活性重组TbPLA2.
• 活性重组TbPLA2的可用性将加速特定抑制剂的发现.
• 这有助于开发新型治疗试索米亚症的新疗法.