在山羊胚胎中编辑CYP19基因使用CRISPR/Cas9和体细胞核转移技术

科学领域:

• 遗传学和基因组学 遗传学和基因组学
• 生物技术是生物技术.
• 动物科学动物科学

背景情况:

• 集群定期间隔的短时间Palindromic重复 (CRISPR/Cas9) 系统为畜牧业的基因组工程提供了革命性的潜力.
• 编码芳酶的CYP19基因对类固醇代谢至关重要,它影响了与畜牧生产和健康相关的特征.
• 牲畜的基因改造有望改善特征和治疗疾病.

研究的目的:

• 研究CRISPR/Cas9在山羊纤维细胞中向修改CYP19基因的疗效,以及随后的胚胎生产.
• 评估通过体细胞核转移 (SCNT) 产生的山羊胚胎中CYP19基因淘汰的效率.
• 为了评估基因编辑的山羊胚胎的发育能力.

主要方法:

• 设计和克隆指导RNAs (gRNAs),将CYP19基因向pX459载体.
• 在Lori-Bakhtiari雄鹿纤维细胞中通过CRISPR/Cas9介导的基因编辑.
• 使用编辑细胞进行体细胞核转移 (SCNT) 来产生克隆的山羊胚胎.
• 在编辑的细胞和胚胎中评估芽细胞发育和淘汰效率.

主要成果:

• 通过使用CRISPR/Cas9技术与SCNT结合,成功生成CYP19基因编辑的山羊胚胎.
• 在编辑的细胞中达到78.4%的淘汰效率,在得到的山羊胚芽细胞中达到68.9%.
• 在基因编辑和未经编辑的胚胎之间,胚胎发育率没有显著差异.

结论:

• 该研究成功建立了一种高效率生成CYP19基因编辑的山羊胚胎的方法.
• 细胞电传和SCNT的结合方法可以保持正常的胚胎发育.
• 这些基因编辑胚胎为未来研究CYP19在山羊生育和生产特征中的作用提供了宝贵的资源.