功能测试和定位在三特异性抗体中的氨酸硫化
Armelle Martelet1, Valerie Garrigue1, Hélène Le Borgne1
1Sanofi R&D, Vitry-sur-Seine 94400, France.
Journal of the American Society for Mass Spectrometry
|March 25, 2025
概括
铁硫化,三特异性抗体 (tsAbs) 中的一个关键修饰,使用电子激活解离质谱法 (EAD-MS/MS) 进行局部定位. 这种修饰对于抗体-抗原结合和蛋白质-蛋白质相互作用至关重要.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分析化学 分析化学
- 免疫学 免疫学 免疫学
背景情况:
- 质谱学 (MS) 对于表征生物治疗药物,如三种特异性抗体 (tsAbs),至关重要.
- 氨酸硫化是一种关键的翻译后修饰,影响蛋白质相互作用,但由于硫酸盐可变性,很难局部化.
- 传统的MS碎片化方法在正离子模式下与性硫酸盐群作斗争.
研究的目的:
- 研究氨酸硫化对复杂的三特异性抗体 (tsAb) 的影响.
- 开发和应用先进的MS技术,以明确地定位氨酸硫化.
- 为了确认tyrosine硫化在tsAb-抗原结合中的功能意义.
主要方法:
- 完整的质量分析和映射以确认硫化存在.
- 电子激活解离 (EAD) MS/MS用于明确的硫酸盐组定位.
- 功能测定涉及硫酶治疗,以评估结合亲和力.
主要成果:
- 使用完整的质量和映射在tsAb上确认了硫化.
- EAD-MS/MS成功生成了保留硫酸盐组的诊断碎片,使局部化成为可能.
- 硫酶治疗导致tsAb与其向抗原结合的显著减少.
结论:
- 硫化氨酸在三种特异性抗体的蛋白质与蛋白质相互作用中起着重要作用.
- EAD-MS/MS是一种强大的技术,用于定位像氨酸硫化等不稳定的翻译后修饰.
- 这项研究突出了铁酸硫化对抗体疗效的功能重要性.
