优化原生质准备和建立PEG介导的基因转换方法在Cordyceps cicadae
Haikun Qi1, Haihua Ruan1, Tao Wu1
1Tianjin Key Laboratory of Food Science and Biotechnology, College of Biotechnology and Food Science, Tianjin University of Commerce, Tianjin 300134, China.
Journal of fungi (Basel, Switzerland)
|March 26, 2025
概括
研究人员开发了一种有效的基因转换方法,用于可食用的真菌Cordyceps cicadae. 这一突破克服了以前的局限性,通过基因编辑和代谢工程实现了未来的工业应用.
科学领域:
- 菌类学 菌类学是指菌类学.
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 科尔迪塞普斯是一种有价值的食用和药用真菌.
- 有限的基因转换系统阻碍了C. cicadae的工业应用.
- 缺少基因组注释和稳定的转换方法.
研究的目的:
- 为了建立一个高效的等离子体转换系统,为Cordyceps.
- 为了优化原生质的准备和再生,用于基因转换.
- 为基因编辑和C. cicadae的代谢工程奠定基础.
主要方法:
- 使用lywallzyme从2天大的C. cicadae骨髓中分离出原生质.
- 优化酶化水解条件 (酶度,时间,温度,真菌年龄).
- 使用pCas9-EGFP作为标记物的PEG介导等离子体转化.
主要成果:
- 最佳的原生体制备:1.5%的Lywallzyme,在34°C下5小时,产生≥5.1 × 10^7 CFU/mL.
- 糖显示出最高的原生细胞再生率 (10.43%).
- 实现了 37.3 CFU/μg DNA 的等离子体转化效率.
结论:
- 一个高效的基因转换协议为Cordyceps虫成功建立.
- 确定了原生质的准备和再生的最佳条件.
- 这种方法为C. cicadae的先进基因操纵提供了至关重要的基础.
