使用流细胞计测量,对化学抗原受体编码的病毒载体和自身的CAR-T细胞产物进行实力测试的定量方法
Juan José Mata-Molanes1,2, Leticia Alserawan1,2, Carolina España1
1Department of Immunology, CDB, Hospital Clinic de Barcelona (HCB), 08036 Barcelona, Spain.
Pharmaceutics
|March 27, 2025
概括
用CD69表达来测量转基因功能,开发了一种针对CAR19-lentiviral载体 (LVVs) 的新的定量功效测试. 这种经过验证的流细胞测量试验可适应其他LVV和CAR-T细胞产品,提供更高的精度和直接的作用评估机制.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 免疫治疗是一种免疫疗法.
- 细胞疗法细胞疗法
背景情况:
- 功效测试对于临床等级的晶状病毒载体 (LVV) 的商业批准至关重要.
- 在临床开发过程中开发合适的强度测试对于CAR-T疗法至关重要.
- 目前的方法可能在精度和直接行动评估机制方面存在局限性.
研究的目的:
- 根据转基因功能活性开发一种可负担的,基于CAR19-LVV的定量功效测试.
- 为了验证测试的精度,特异性,稳定性,线性和准确性.
- 评估该试验对其他CAR编码LVV和自身CAR-T细胞产品的适应性.
主要方法:
- 在CAR转化Jurkat细胞和CD19表达点细胞的共同培养系统中探索功能活动指标.
- 选择并开发了一种通过流细胞计测量测量CD69表达 (T细胞激活标志物) 的定量试验.
- 验证了测试方法,并测试了其适应CARBCMA-LVV和自身CAR-T细胞产品的适应性,包括细胞毒性评估.
主要成果:
- 在CAR转化细胞上的CD69表达是CAR功能的特定指标.
- 通过标准曲线校准的平均光强度 (MFI) 对CD69的量化产生了精确和准确的测定.
- CD69试验显示了对CARBCMA-LVV和自身的CAR-T细胞的适应性,反映了细胞毒性,并且与IFNγ试验相比显示变异性降低.
结论:
- 成功开发了一种经过验证的,定量性的,在实验室中基于细胞的功效测试,使用CAR19-LVV的流细胞计.
- 该试验通过检测T细胞在CAR抗原结合时的激活来测量转基因功能,并且可以适应其他LVV和CAR-T产品.
- 这种基于CD69的测定提供了减少变异性和同时评估自主CAR-T产品的作用机制,包括细胞毒性.
