使用dCas9核糖核蛋白 (dRNP) 复合体对细胞转录态进行有效的DNA和无病毒工程

科学领域:

• * 分子生物学 * 分子生物学
• * 基因调控 * 基因调控
• * 合成生物学 * 合成生物学

背景情况:

• *CRISPR核糖蛋白 (RNP) 复合体在基因组编辑方面优于等离子体或病毒方法.
• *dCas9融合蛋白RNP用于转录基因组和表观基因组操纵较难获得.
• *第二代CRISPR激活RNP (dRNP) 提供了更好的可访问性和功能.

研究的目的:

• *描述第二代CRISPRa RNP (dRNP) 的生产,交付和优化.
• * 描述dRNP治疗在人类细胞中的转录和细胞效应.
• * 评估dRNP在基因激活,多重化和细胞命运转换方面的效率.

主要方法:

• *dCas9融合蛋白RNP (dRNP) 的产生和优化.
• *在各种人体细胞类型中提供和描述dRNP治疗方法.
• *对基因激活强度,时间精度和多重复合能力的评估.
• * 在干细胞和分化细胞中使用dRNP进行细胞命运转换的演示.

主要成果:

• *dRNP表现出高效的细胞吸收和强大的基因激活,即使是静止的基因.
• *基因激活是立即和时间精确的,与基于DNA的CRISPRa策略不同.
• *dRNP能够实现高目标复杂化,同时保持不减的基因激活效率.
• *在单个促进体的密集多重化协同增加了基因转录.
• *dRNP有效指导和转化人类干细胞和分化细胞中的细胞命运.

结论:

• *第二代dRNP是精确激活基因的强大而易用的工具.
• *dRNP比基于DNA的方法具有优势,包括即时的时间控制和高复杂化能力.
• *dRNP促进了有效的细胞命运操纵,而不需要DNA输送或病毒载体.