开发一种临床上可应用的高分辨率试验,用于精子马赛克主义

科学领域:

• 生殖遗传学 生殖遗传学
• 分子生物学分子生物学
• 临床诊断 临床诊断 临床诊断

背景情况:

• 精子马赛克主义,即在精子的一个子集中发生致病变体,是遗传遗传性疾病的重要原因.
• 精子马赛克的临床诊断受到验证,患者报告结果的缺失所阻碍.

研究的目的:

• 开发和验证一种敏感的,通过CLIA验证的试验,用于检测低水平的精子马赛克.
• 为了能够准确的复发风险评估的情侣经历新的致病变体.

主要方法:

• 开发了Sensitive Assay for Mosaicism (SAM),一种两相方法,涉及具有独特分子标识符 (UMI) 的深度测序和CLIA验证的桑格测序.
• 利用下一代测序和纳米孔测序平台与UMI来提高准确性.
• 在来自14名参与者的精液样本上测试了SAM,之前的后代受到de novo致病变体的影响.

主要成果:

• SAM的检测极限约为0.005%,显著提高了测序准确度.
• 独特的分子标识符 (UMIs) 将NGS的精度从99.9%提高到>99.999%;纳米孔的精度从93%提高到>99.99%.
• 精子马赛克主义在两个案例中被确定 (FAM111A在5.51%和FGFR3在0.0129%),FGFR3被验证为自私突变.

结论:

• 对马赛克的敏感检测 (SAM) 提供了低水平精子马赛克的灵敏而准确的检测,其结果经过CLIA验证.
• SAM促进遗传咨询,复发风险评估和明智的生殖决策,包括用PGT-M进行试管婴儿,精子捐赠和产前诊断.