从等离子体到纯蛋白:SARS-CoV-2的生产和特征 PLpro
Anna De Falco1,2,3, Rebecca Greene-Cramer1,2,3, Ben A Surina1,2
1Center for Biotechnology and Interdisciplinary Sciences, Rensselaer Polytechnic Institute, Troy, New York, 12180, USA.
bioRxiv : the preprint server for biology
|March 31, 2025
概括
我们开发了生产SARS-CoV-2帕帕因样蛋白酶 (PLpro) 的高效协议,这是COVID-19抗病毒药物的关键目标. 这种方法产生了大量的纯化PLpro,并为高级结构和功能研究提供了样本.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 药物发现 药物发现 药物发现
背景情况:
- SARS-CoV-2 帕帕因样蛋白酶 (PLpro) 是开发抗病毒治疗COVID-19的关键目标.
- 有效且可扩展的活性PLpro的生产对于药物开发和结构研究至关重要.
研究的目的:
- 建立强大的协议,用于重组生产和净化 SARS-CoV-2 PLpro 在大肠杆菌.
- 为了产生同位素丰富的PLpro用于核磁共振 (NMR) 研究.
- 用各种生化和生物物理技术详细描述PLpro的表征方法.
主要方法:
- 在大肠杆菌中表达PLpro作为与*Saccharomyces cerevisiae* Smt3 (SUMO) 的融合蛋白.
- 聚变蛋白的净化,然后进行柱上或溶液中的水解,以释放原生PLpro.
- 使用质谱,1DF-NMR,2D异质核NMR和基于光的酶试验进行表征.
主要成果:
- 实现了高产净化的本地PLpro,高达38毫克L-1.
- 成功生成了适用于NMR分析的同位素丰富样本.
- 建立了包括质谱和各种NMR技术在内的综合性表征方法.
结论:
- 提出的协议使得在大肠杆菌中有效地生产活跃的SARS-CoV-2 PLpro.
- 这些方法促进了对COVID-19抗病毒药物开发至关重要的结构和功能研究.
- 具有良好特征的PLpro和合适样本的可用性将加速新疗法的发现.
