基于Cap蛋白的阻断ELISA方法的开发和应用,用于检测对猪圈病毒2的抗体

科学领域:

• 兽医免疫学 兽医免疫学
• 猪病理学 猪病理学
• 诊断试验开发 诊断试验开发

背景情况:

• 猪病毒2型 (PCV2) 是对猪产业的重大经济威胁,导致免疫抑制并加剧其他感染.
• 目前用于PCV2抗体检测的间接ELISA方法容易产生假阳性,因此需要更具体的诊断工具.
• 之前针对PCV2的阻断ELISA方法依赖于具有挑战性和耗时的病毒净化.

研究的目的:

• 开发和验证一种新型,高效的阻断酶相关免疫吸收试验 (ELISA) 用于检测对猪肉环状病毒2型 (PCV2) 的抗体.
• 建立一种标准化和高度特定的方法,用于对猪群中PCV2的血清学监测.
• 评估新的阻断ELISA对评估疫苗接种猪血清转换的有用性.

主要方法:

• 开发一种使用复合Cap蛋白作为抗原和使用针对PCV2Cap蛋白的单克隆抗体作为检测器的阻断ELISA.
• 使用接收机运行特征曲线分析确定截止值 (33.8%).
• 对敏感性 (94.7%),特异性 (96.1%) 和与其他常见的猪病毒 (ASFV,PEDV,PRV,PRRSV) 交叉反应性的评估.
• 评估测试内和测试间的变化系数 (<10%) 和与使用402个猪血清样本的商业间接ELISA套件进行比较.

主要成果:

• 开发的阻断ELISA显示了PCV2抗体检测的高灵敏度 (94.7%) 和特异性 (96.1%).
• 该试验没有显示与ASFV,PEDV,PRV和PRRSV抗体的交叉反应,证实了其特异性.
• 在新的阻断ELISA和商业间接ELISA套件之间观察到很高的一致性 (98.76%的协议,kappa = 0.888).
• 试验内和试验间的变化系数始终低于10%,表明可重现性良好.

结论:

• 开发的阻断ELISA是一种高效,标准化和高度准确的方法,用于对猪PCV2进行血清学监测.
• 这种测定为评估PCV2-接种疫苗的猪血清转化提供了可靠的工具.
• 该方法克服了以前技术的局限性,为PCV2诊断提供了更好的特异性和易于解释.