新型原生逆相液态染色学 (nRPLC) /MS用于抗体-药物结合物 (ADC) 特性和药物-抗体比率 (DAR) 评估

科学领域:

• 生物制药学分析
• 染色学和质谱学 染色学和质谱学
• 药物开发 药物开发

背景情况:

• 对抗体-药物联合体 (ADC) 中的药物-抗体比率 (DAR) 种类的准确表征对于ADC的发展至关重要.
• 疏水性相互作用色谱 (HIC) 是DAR分析的黄金标准,但由于缓冲系统和离线分离,在峰值内阐明DAR物种面临挑战.
• 像本地SEC-MS和RPLC-MS这样的现有方法对复杂的ADC物种具有选择性和分辨率的限制.

研究的目的:

• 开发和验证ADC DAR物种表征的创新在线本地MS分析策略.
• 克服传统HIC和其他ADC分析方法的局限性.
• 证明平台的可行性,以描述各种类型的ADC,包括链接和特定站点的ADC.

主要方法:

• 开发新的原生逆相液态色谱 (nRPLC) 列,具有不同的疏水性,用于MS友好的化.
• 在线将nRPLC与高分辨率Orbitrap MS (nRPLC-MS) 结合起来,用于对完整的DAR物种进行直接分析.
• 优化LC和MS参数,以在高流量条件下更好地检测DAR物种.

主要成果:

• 与原生SEC-MS和RPLC-MS相比,nRPLC-MS方法实现了更好的分离,选择性和分辨率.
• 使用低离子强度盐证明成功保留和表征未结合抗体 (DAR0).
• 启用了DAR4物种的定位异构体的染色学分离,具有不同的结合链接,HIC无法实现这一壮举.
• 观察到nRPLC-MS方法与传统的HIC分析之间存在很强的相关性.

结论:

• 开发的nRPLC-MS平台为ADC DAR物种提供了无偏见的高通量表征,而无需离线分成.
• 这种方法显著提高了评估ADC可开发性和可制造性的能力.
• 该平台在各种联结方法和有效载荷类中显示出多样化的ADC表征的巨大潜力.