一个发针记者驱动的反CRISPR/Cas信号放大循环用于终端脱氧核乙基转移酶活动检测

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 生物技术是生物技术.
• 生物感应是一种生物感应.

背景情况:

• 由于目标特异性和跨裂变,CRISPR/Cas12a对生物感知有价值.
• 在痕迹检测中,线性放大限制了CRISPR/Cas12a.
• 为了提高灵敏度,需要一种新的放大策略.

研究的目的:

• 开发一个以头针记者驱动的CRISPR/Cas12a (HR-CRISPR) 系统,用于指数级信号放大.
• 建立一个单阶段,敏感的测定终端脱氧核酸转移酶 (TdT) 活性.
• 证明HR-CRISPR对TdT检测,抑制剂查和血清样本分析的有用性.

主要方法:

• 开发了一个积极的反循环,使用一个针头记者和Cas12a.
• 将HR-CRISPR系统应用于终端脱氧核酸转移酶 (TdT) 活性测定.
• 利用逆转录酶用于基于crRNA模板的信号放大.

主要成果:

• 在一步反应中实现了指数级和敏感信号放大.
• 量化了TdT活动,其低检测极限为4.55 × 10-6 U.
• 已证明适用于人类血清中抑制剂查和TdT活性监测.

结论:

• HR-CRISPR系统为TdT活动量化提供了一种简单而高度敏感的方法.
• 这种方法克服了传统CRISPR/Cas12a系统的线性放大限制.
• HR-CRISPR是一个用于敏感生物传感应用的多功能平台.