一个以探测器为基础的目标参与测试活细胞中的kinases

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 药理学 药理学是指药理学的学科.
• 化学生物学 化学生物学

背景情况:

• 激酶抑制剂药物的有效性和安全性取决于选择性.
• 目前的分析方法使用细胞提取物,而不是活细胞.
• 开发细胞内测试对于准确的剖析至关重要.

研究的目的:

• 开发和验证一个强大的细胞内化学蛋白学试验,用于酶抑制剂的分析.
• 为了比较细胞内目标参与与传统的基于溶酸盐的测试.
• 为了确定活细胞中激酶抑制剂的非目标相互作用.

主要方法:

• 开发了一种新型的共价探头,采用跨环氧 octene 柄,用于增强激酶捕获.
• 优化了探头度,化时间,并使用同位体质量标记进行量化.
• 将达沙替尼和达纳西基利的细胞内特征与基于 lysate 的 kinobeads 试验进行比较.

主要成果:

• 新的协议证明了强大的酶捕获和丰富.
• 细胞内分析显示,在等级顺序结合方面,与基于溶酸盐的试验有很好的一致性.
• 观察到dinaciclib的IC50值的变化,表明细胞内因素的影响.
• 鉴定出Sepiapterin减少酶 (SPR) 和ABCC1作为非酶抑制剂支架的目标.

结论:

• 开发的细胞内化学蛋白质组学试验可以更准确地评估激酶抑制剂的向参与.
• 细胞内条件显著影响药物标特征和结合 afinities.
• 识别SPR和ABCC1等非目标物质对酶抑制剂的有效性和安全性有影响.