制备,并对工程上制造的封闭酶的酶活性分析
Zi-Ru Wang1, Ling-Ting Li1, Fei-Fei Xiong1
1Shanghai Institute of Biological Products Co., Ltd., 350 Anshun Road, Shanghai 200051, China.
Enzyme and microbial technology
|April 6, 2025
概括
一种工程融合封闭酶 (DDGSV) 结合了 Vaccinia 封闭酶 (VCE) 和 2'-O-甲基转移酶 (VP39) 以实现有效的 Cap1 mRNA 合成. 这项创新简化了mRNA限制,减少了潜在的mRNA疫苗开发成本和杂质.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 生物化学 生物化学
- 病毒学 病毒学
背景情况:
- 疫苗封闭酶 (VCE) 和2-O-甲基转移酶 (VP39) 对于合成Cap1mRNA至关重要,对于mRNA稳定性,转化和免疫逃避至关重要.
- 目前的酶封闭方法分别使用VCE和VP39,这在过程复杂性和成本方面带来了挑战.
研究的目的:
- 通过连接VCE和VP39来设计一个融合封闭酶 (DDGSV),以提高mRNA封闭效率并降低生产成本.
- 评估工程DDGSV酶的结构完整性,表达和功能性能.
主要方法:
- 通过使用柔性链接器将VCE和VP39遗传链接而构建了融合酶 (DDGSV).
- 使用AlphaFold2.2预测了DDGSV的三级结构.
- 在大肠杆菌中表达了DDGSV,并评估了其限制效率和mRNA完整性.
- 在HEK 293T细胞中测试了DDGSV封顶mRNA的性能.
主要成果:
- 预测AlphaFold2在DDGSV融合酶的活性位点中没有显示任何固体阻碍.
- 设计的DDGSV酶在2小时内实现了80.19%的限制效率,与商业酶相美.
- DDGSV覆盖的GFP mRNA在HEK 293T细胞中显示出高的表达水平.
- 为了快速检测效率,研究了RNA点涂抹,尽管定量方法仍然是必要的.
结论:
- 设计的DDGSV融合酶有效合成Cap1mRNA,为目前的方法提供了一个有希望的替代方案.
- DDGSV为mRNA限制提供了一种具有成本效益和精简的方法,对mRNA疫苗开发有重大影响.
