优化从Neisseria lactamica中分离和净化外膜囊泡 (OMVs) 的方法
Ronaldo Moraes Preto1,2, Vithória Carolyna Trindade Dos Santos1,2, Marcos Vinicius Santos Lordelo1,2
1Laboratório de Desenvolvimento de Vacinas, Instituto Butantan, São Paulo, Brazil.
Applied microbiology and biotechnology
|April 7, 2025
概括
这项研究探讨了从细菌中净化外膜囊泡 (OMVs) 的新方法,提高了疫苗开发的产量. 将触流过与多模式色谱相结合,为高纯度的OMV隔离提供了一个可扩展的解决方案.
科学领域:
- 微生物学和免疫学
- 生物技术和生物加工
- 疫苗开发 疫苗开发
背景情况:
- 外膜囊泡 (OMV) 是由阴性细菌释放的纳米颗粒,对于疫苗开发至关重要,特别是针对Neisseria meningitidis血清组B (MenB).
- 牛乳菌OMV显示为新型亚单元疫苗的平台,但隔离和净化方面的挑战阻碍了它们的广泛应用.
- 目前的方法,如超离心法 (UC) 和尺寸排除染色法 (SEC),对大规模生产有局限性,通常产量不足.
研究的目的:
- 评估Neisseria lactamica OMVs的替代净化技术,旨在克服传统方法的局限性.
- 确定可扩展和高效的净化策略,以提高OMV恢复和疫苗应用的纯度.
- 为了比较触流过 (TFF),膜染色学和多式染色学与UC和SEC.
主要方法:
- 用各种膜切断点 (例如300kDa) 的触流过 (TFF) 进行了OMV隔离的评估.
- 研究了Sartobind® Q膜染色学和多式染色学 (CaptoTM Adhere,CaptoTM Core 400) 进行OMV净化.
- 使用高性能液态染色学 (HPLC) 分析了净化效率,并量化了蛋白质回收.
主要成果:
- 使用300kDa切割膜的TFF产生了类似于UC的OMV,但蛋白质回收率超过两倍.
- 萨尔托邦德® Q膜染色学显示OMV恢复率低 (8.7%),表明在测试条件下无效.
- 卡普托TM Adhere和卡普托TM Core 400多模式染色学实现了较高的OMV回收率,分别为59.0%和72.0%,证明了卓越的净化能力.
结论:
- 将TFF与300kDa膜相结合,然后采用CaptoTM Core 400多模式染色学,是大规模OMV净化的一种有效策略.
- 与传统方法相比,这种综合方法显著提高了OMV的产量和纯度.
- 开发的过程为来自非病原体的OMV提供了可扩展和高效的净化方法,促进它们在疫苗开发中的使用.
