dFLASH; 双F光转录因子活性传感器用于组素综合活细胞报告和高含量查

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 基因组学就是基因组学.
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 对转录因子 (TF) 活动的准确活细胞报告对于推进合成生物学,药物发现和功能基因组学至关重要.
• 现有的方法往往缺乏全面TF活动分析所需的特异性,敏感性或动态范围.

研究的目的:

• 引入dFLASH (双光转录因子活动传感器),这是一个模块化和基因组集成的系统,用于活细胞TF活动报告.
• 证明dFLASH在检测内源性TF活性,协激活剂招募以及其在功能基因组学和药物查中的应用方面的实用性.

主要方法:

• 开发一个模块化,基因组集成的双光报告系统 (dFLASH).
• 对于感知内源性缺氧诱导因子 (HIF) 和孕激素受体 (PGR) 活性,dFLASH的验证.
• 在功能基因组学和全基因组CRISPR淘汰查中,将dFLASH与CRISPRoff结合使用.
• 通过选自然产品库,利用dFLASH与高内容成像用于药物发现.

主要成果:

• dFLASH提供内源性TF活动的均和特异性检测和协同激活剂的招募.
• 该系统具有强大的信号噪声比和强大的选性能 (Z' = 0.610.74),具有双色核光.
• 在HIF调节研究,全基因组CRISPR KO选和HIF通路调节者的鉴定中成功应用.

结论:

• dFLASH是一个多功能和强大的平台,用于动态,正常化的活细胞TF活动传感.
• 该系统显著提高了功能基因组学研究和药物发现管道的能力.
• dFLASH为各种需要精确监测转录因子活性的应用提供了有价值的工具.